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化学键合相色谱法

2018-11-13

 一, 概念

借助于化学反应的方法将有机分子以共价键连接在色谱担体上而获得的固定相称为化学键合相,以化学键合相为固定相的色谱法称为化学键合相色谱法。

二, 化学键合相的优越性

1, 消除了担体上的表面活性作用点,清除了某些可能的催化活性

2, 溶剂冲洗,使用过程中固定相不流失(这也是相对而言,时间久了或者超出使用范围权限,固定相还是会流失);

3, 稳定性好;高温可以提高传质速率,从而提高柱效,如在小肽药物中的应用

4, 表面改性灵活,容易获得重复性产品控制硅胶的质量和键合工艺即可);

5, 载样量大,比普通硅胶约高一个数量级;

6, 溶剂的残留效应小,梯度洗脱平衡快。

三, 化学键合相的稳定性

1, 紧密键合的二甲基C18固定相比整体修饰的配基能更好地阻止硅胶遭遇破坏;例如日本株式会社YMC研发的一款Triart-C18C18键合密度达到了20%,高于市面上绝大多数的C18因此产生了优越的化学耐受性。

2, pH流动相更易于溶解基体本身,而键合相的水解则是很弱的。对于硅胶基质,在pH9.0 水溶液中,Si-O-Si 很容易被强碱性亲试剂(KOHNaOH切断;甚至有生物大分子在制备过程中,需要以NaOH溶液除去杂蛋白。目前市面上,除瑞典的 Akzo Nobel公司 Kromasil填料外,日本株式会社YMC公司 Triart填料也能很好耐受碱性,甚至超过前者的使用次数。

 

3, 多孔硅胶的特性决定了基质的溶解速率,纯硅胶更容易溶解,而含有金属杂质的硅胶溶解缓慢。所以单纯硅胶的寿命和峰形拖尾上,是一个矛盾的

4, 甲醇的相比,以乙腈作为流动相可以延长柱子的寿命;但是注意,乙腈的使用成本一般高于甲醇的2以上。

5, 缓冲液的选择也很重要:碳酸盐和磷酸盐缓冲液比有机缓冲液柱子的破坏性更强;较高浓度的缓冲液比较低浓度的缓冲液破坏性更强。因此,尽量避免使用磷酸盐,碳酸盐缓冲液,且缓冲浓度不易过高,通常为10-50mmol/L

四, 分类

1, 按键合相的表面结构分:单分子键合和聚合键合;

2, 键合有机硅烷的官能团性质分:极性键合相、非极性键合相、离子交换键合相。

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